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熒光蛋白激發(fā)的日常用途

熒光蛋白激發(fā)的日常用途

時(shí)間:2020-11-30 編輯:SunLonge

熒光蛋白+激發(fā)光源在生物基因研究中發(fā)揮著巨大的作用,熒光蛋白在激發(fā)光源的激發(fā)下發(fā)出熒光,使得研究效果更直觀(guān)。以下為熒光蛋白的10個(gè)日常用途,本文為深圳熒鴻摘錄,僅供參考。關(guān)于激發(fā)光源選擇,請(qǐng)咨詢(xún)深圳熒鴻:0755-89233889.

(1) Localization:可以放在目的基因的N端,也可以放在目的基因的C端。這樣的構(gòu)建方式可以幫助我們觀(guān)察到目的基因是什么時(shí)候開(kāi)始表達(dá)以及在哪里表達(dá);

(2) Transcription reporter:將熒光蛋白放在待研究啟動(dòng)子的后面,可以很好的觀(guān)察或者驗(yàn)證該啟動(dòng)子在特定細(xì)胞中的啟動(dòng)活性;

(3) FRET(Frster Resonance Energy Transfer):用來(lái)研究?jī)蓚€(gè)不同的蛋白或者用一個(gè)蛋白的兩個(gè)不同結(jié)構(gòu)域之間的相互作用關(guān)系。通常是使用激發(fā)/發(fā)射光譜有重疊的兩個(gè)熒光蛋白。目前蛋白-蛋白相互作用研究中最廣泛應(yīng)用的FRET對(duì)就是青色熒光蛋白(cyan fluorescent protein, CFP)、黃色熒光蛋白(yellow fluorescent protein, YFP)。

(4) Split EGFP:FRET的另一種實(shí)現(xiàn)方法,同樣被用來(lái)研究蛋白與蛋白的相互作用。具體是將EGFP分割成兩部分,分別融合到兩個(gè)蛋白,當(dāng)兩個(gè)蛋白靠近時(shí),EGFP的兩部分蛋白開(kāi)始折疊,成熟到發(fā)光。

(5) Biosensors:用來(lái)監(jiān)測(cè)細(xì)胞內(nèi)小生物分子或其他生理過(guò)程,比如AAV載體中的鈣指示劑。

(6) Optogenetics:是研究人員使用一種新的光控方法選擇并打開(kāi)了某種生物的一類(lèi)細(xì)胞。光遺傳技術(shù)–21世紀(jì)神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域最引人注目的革新,其主要原理是首先采用基因操作技術(shù)將光感基因(如ChR2,eBR,NaHR3.0,Arch或OptoXR等)轉(zhuǎn)入到神經(jīng)系統(tǒng)中特定類(lèi)型的細(xì)胞中進(jìn)行特殊離子通道或GPCR的表達(dá)。光感離子通道在不同波長(zhǎng)的光照刺激下會(huì)分別對(duì)陽(yáng)離子或者陰離子的通過(guò)產(chǎn)生選擇性,從而造成細(xì)胞膜兩邊的膜電位發(fā)生變化,達(dá)到對(duì)細(xì)胞選擇性地興奮或者抑制的目的。

(7) Chemogenetics:利用遺傳學(xué)原理,以化學(xué)小分子為工具解決生物的問(wèn)題,或通過(guò)干擾、調(diào)節(jié)正常生理過(guò)程了解蛋白質(zhì)的功能。

(8) In Vivo Imaging:活體成像系統(tǒng)成像原理包括生物發(fā)光與熒光兩種技術(shù)。生物發(fā)光是用熒光素酶基因標(biāo)記DNA,利用其產(chǎn)生的蛋白酶與相應(yīng)底物發(fā)生生化反應(yīng)產(chǎn)生生物體內(nèi)的光信號(hào);而熒光技術(shù)則采用熒光報(bào)告基因(GFP、RFP)或熒光染料(包括熒光量子點(diǎn))等新型納米標(biāo)記材料進(jìn)行標(biāo)記,利用報(bào)告基因產(chǎn)生的生物發(fā)光、熒光蛋白質(zhì)或染料產(chǎn)生的熒光就可以形成體內(nèi)的生物光源。前者是動(dòng)物體內(nèi)的自發(fā)熒光,不需要激發(fā)光源,而后者則需要外界激發(fā)光源的激發(fā)。

(9) Cell marking/selection:大家做細(xì)胞實(shí)驗(yàn),通常都喜歡質(zhì)粒帶有熒光標(biāo)簽比如GFP,有了該熒光標(biāo)簽可以很方便的判斷質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染效率。這種情況通常是熒光蛋白由另外一個(gè)不同的啟動(dòng)子控制或者由與目的基因相同的啟動(dòng)子控制但是通過(guò)IRES連接。

(10) FACS:流式細(xì)胞分選技術(shù),可以方便的分選出帶有熒光蛋白的細(xì)胞,分選出的細(xì)胞可以進(jìn)行培養(yǎng)或其它處理,做更深的研究

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