自綠色熒光蛋白被發(fā)現(xiàn)后，陸陸續(xù)續(xù)有多種顏色的熒光蛋白被發(fā)現(xiàn)，并應(yīng)用于生物研究室研究。怎么選擇適合自己的熒光蛋白研究呢？請(qǐng)參考以下8個(gè)因素：深圳熒鴻僅為整理者，以下內(nèi)容僅供參考。關(guān)于熒光蛋白激發(fā)光源，請(qǐng)咨詢0755-89233889！

（1） 激發(fā)波長/發(fā)射波長：每一種熒光蛋白都有其獨(dú)特的激發(fā)波長和發(fā)射波長，因此，選擇的熒光蛋白必須是手上系統(tǒng)能夠激發(fā)和檢測到。舉例，你的顯微鏡只有兩個(gè)激發(fā)器，488 nm和561 nm，那你就不能夠選擇遠(yuǎn)紅外熒光蛋白。又比如當(dāng)使用不止一個(gè)熒光蛋白時(shí)，確保他們的發(fā)射波長沒有重疊。深圳熒鴻激發(fā)光源有單色、雙色、多色可供選擇。

（2） 寡聚反應(yīng)：第一代熒光蛋白易于寡聚化，當(dāng)和目的基因融合表達(dá)是，可能會(huì)影響目的基因蛋白的生物學(xué)功能。因此建議使用單體的熒光蛋白，比如mCherry。

（3） 氧氣：許多熒光蛋白的成熟需要氧氣，特別是衍生自GFP的那些熒光蛋白。如果這些熒光蛋白處于缺氧環(huán)境，那可能就觀察不到熒光。

（4） 成熟時(shí)間：成熟時(shí)間是熒光蛋白正確折疊和產(chǎn)生發(fā)色團(tuán)所需的時(shí)間。時(shí)間可能是幾分鐘到幾小時(shí)，舉例superfolder GFP (sfGFP) 和mNeonGFP在37 °C所需時(shí)間小于10min；mCherry 需要大概15 min； TagRFP 需要大概100 min；DsRed 大概需要10 hours。

（5） 溫度：溫度會(huì)影響熒光蛋白的成熟時(shí)間和熒光強(qiáng)度，比如EGFP適合37 °C，所以EGFP最適合哺乳動(dòng)物或者細(xì)菌的研究，而GFPS65T相對(duì)適合酵母的研究。

（6） 亮度：熒光蛋白的亮度值由消光系數(shù)與量子產(chǎn)率的乘積計(jì)算得出。在許多情況下，將熒光蛋白的亮度與EGFP(設(shè)定為1)進(jìn)行比較，有一些熒光蛋白非常暗淡（例如TagRFP657，其具有亮度只有0.1），因此亮度也需要考慮。

（7） 耐光性：長時(shí)間暴露在激發(fā)光下，熒光分子被漂白（即失去發(fā)光的能力）。光穩(wěn)定性可短至100毫秒（如EBFP）或長達(dá)1小時(shí)（如mAmetrine1.2）。但是，對(duì)于大多數(shù)熒光蛋白來說，它只需幾秒鐘到幾分鐘。另外，光穩(wěn)定性可能也會(huì)受實(shí)驗(yàn)參數(shù)影響，例如激發(fā)光強(qiáng)度，pH或溫度等。

 

（8） pH穩(wěn)定性：如果計(jì)劃在酸性環(huán)境中表達(dá)熒光蛋白，則此參數(shù)非常重要，一些熒光蛋白具有不同的ex/em光譜（例如mKeima）或在pH變化時(shí)熒光強(qiáng)度會(huì)發(fā)生改變（例如pHluorin，pHTomato）。