在學(xué)校學(xué)習(xí)時(shí),上實(shí)驗(yàn)課是最興奮的,因?yàn)閷?shí)驗(yàn)課不僅僅是理論,還可以自己動(dòng)手做實(shí)驗(yàn),理論+實(shí)驗(yàn),讓學(xué)習(xí)更加明了。同樣,紫外線可以對(duì)小白鼠眼睛會(huì)造成什么傷害,通過(guò)實(shí)驗(yàn),就能一清二楚了,某大學(xué)老師從我們深圳熒鴻采購(gòu)紫外線燈用于此實(shí)驗(yàn)。
實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>
1、? 制備腳理想的視網(wǎng)膜紫外線光損傷的小鼠模型
2、? 探討調(diào)往相關(guān)蛋白Fas、FasL、Bcl-2及Bax在視網(wǎng)膜紫外線光損傷發(fā)生、發(fā)展中的作用
實(shí)驗(yàn)方法
將30只昆明小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組。實(shí)驗(yàn)組再分為紫外線光照1、2、3、4周組,所有小鼠經(jīng)晝夜循環(huán)光環(huán)境適應(yīng)7天,實(shí)驗(yàn)前暗適應(yīng)36小時(shí),建立紫外線光損傷模型,實(shí)驗(yàn)組接受每天持續(xù)8小時(shí)的紫外線光照射,光照強(qiáng)度為2200±138Lux,分別在照射后1、2、3、4周后摘除眼球,右眼行視網(wǎng)膜HE及Fas、FasL、Bcl-2、Bax染色,左眼行視網(wǎng)膜勻漿中SOD活力、MDA含量檢測(cè);光鏡觀察枧網(wǎng)膜的形態(tài)學(xué)改變并對(duì)比各組視網(wǎng)膜ONL層厚度的差異,應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法比較Fas、FasL、Bcl-2及Bax在各組視網(wǎng)膜陽(yáng)性表達(dá)數(shù)量的差異。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
1光照前正常小鼠視網(wǎng)膜形態(tài)正常,組織結(jié)構(gòu)層次清楚,內(nèi)外節(jié)排列整齊,外核層細(xì)胞排列規(guī)則,染色均勻,細(xì)胞形態(tài)規(guī)整,F(xiàn)as、FasL、Bcl-2、Bax染色陰性及弱陽(yáng)性。光照后小鼠視網(wǎng)膜感光細(xì)胞層出現(xiàn)了光損傷,光鏡示不同程度的外節(jié)空泡樣變,內(nèi)外節(jié)排列紊亂、腫脹、碎解,外核層變薄,出現(xiàn)核濃染及不規(guī)則細(xì)胞核,隨光照后時(shí)間推移而損傷逐漸加重。Fas、FasL蛋白分別自損傷后周開(kāi)始看到陽(yáng)性細(xì)胞或表達(dá)增強(qiáng),并隨時(shí)間延長(zhǎng),表達(dá)增強(qiáng),3w時(shí)
達(dá)高峰;Bcl-2隨光照時(shí)間延長(zhǎng)稍有增強(qiáng);Bax表達(dá)呈持續(xù)增強(qiáng)
2通過(guò)計(jì)算機(jī)輔助圖像分析對(duì)比各組外核層厚度變化,紫外線光照組光照后外核層(ONL)厚度與正常對(duì)照組比較明顯變薄,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<005),實(shí)驗(yàn)組各組之間除光照3w組與光照4w組外,其余各組之間比較差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。3。紫外線光照組光照后
SOD活力、MDA含量與正常對(duì)照組比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)
實(shí)驗(yàn)結(jié)論
中長(zhǎng)波紫外線光能夠引起小鼠視網(wǎng)膜的光損傷;其損傷程度為光照強(qiáng)度及時(shí)間依賴性。視網(wǎng)膜紫外線光損傷與脂質(zhì)過(guò)氧化及自由基的產(chǎn)生有關(guān)。凋亡相關(guān)基因蛋白Fas、FaL促進(jìn)視網(wǎng)膜光損傷的發(fā)生與發(fā)展,凋亡相關(guān)基因蛋白Bax亦促進(jìn)視網(wǎng)膜光損傷的發(fā)生,凋亡一直基因蛋白Bcl-2雖稍有增強(qiáng),但不足以抑制細(xì)胞進(jìn)入凋亡途徑。
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