綠色熒光蛋白(green fluorescent protein,GFP)在收到紫光外或者藍光激發(fā)時,發(fā)射綠色熒光,可在各種異源細(xì)胞,如細(xì)菌/昆蟲以及植物細(xì)胞中表達,在植物研究中,通常需要各種顯微鏡來確定該基因是否表達,偶爾也會因為植物自發(fā)熒光導(dǎo)致假陽性的誤判。
觀察GFP發(fā)光可用深圳熒鴻實驗室藍光手電筒ULV450,紫外線激發(fā)光源SL8300,顯微鏡熒光激發(fā)光源SL169照射植物,同時需要佩戴專用的熒光觀察眼鏡,使用遮光片觀察效果更佳。GFP熒光反應(yīng)用熒光顯微鏡甚至肉眼就可以觀察到,且靈敏度高,對于單細(xì)胞水平的表達也可識別。
綠色熒光蛋白在紫外線的激發(fā)下發(fā)光
GFP是從水母分離出的一種天然熒光蛋白,分子量約27000。為一個由238個氨基酸殘基組成的單鏈多肽,其熒光發(fā)射峰在509nm,最大激發(fā)波長為395 nm,并在470 nm處有一肩峰,GFP的化學(xué)性質(zhì)相當(dāng)穩(wěn)定,其變性需在90℃或pH<4.0或pH>12.0的條件下用6mol/L鹽酸胍處理。GFP的熒光發(fā)光有兩個明顯的吸收帶,對應(yīng)于GFP的兩種不同構(gòu)象的基態(tài)A和B?;鶓B(tài)A對應(yīng)于395nm的吸收峰,基態(tài)B對應(yīng)于475nm的吸收峰,基態(tài)A占優(yōu)勢,基態(tài)B的分子數(shù)量約是基態(tài)A的1/6,兩種基態(tài)間能緩慢地轉(zhuǎn)換,但激發(fā)態(tài)A 之間的轉(zhuǎn)換很快且發(fā)生了質(zhì)子轉(zhuǎn)移,A 快速高效地衰變至另一激發(fā)態(tài),應(yīng)該存在一個中間過度態(tài)I,質(zhì)子轉(zhuǎn)移使A 轉(zhuǎn)變成I ,I 回遷到基態(tài)I時產(chǎn)生發(fā)射峰504nm的熒光,構(gòu)象改變使I 轉(zhuǎn)變成B ,由B到B發(fā)射熒光而不發(fā)生質(zhì)子轉(zhuǎn)移。目前,對于GFP的作用機理較為認(rèn)同的僅僅是:GFP是生物發(fā)光過程中的能量受體,并且是最終的發(fā)光體,不同的生物發(fā)光機制各不相同,不同的突變體發(fā)光機制也有很大差異。
紅色熒光蛋白在紫外線的激發(fā)下發(fā)光
除此之外,深圳熒鴻實驗室燈還可以用做以下用途:
1、 野外、實驗室原位測定GFP(綠色熒光蛋白)。
2、 應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因作物研究。
3、 區(qū)別可遺傳性改良生物體和不可遺傳的改良生物體。
4、 用于基因表達的研究。
5、 用于Rhodamine(紅色熒光染料)、葉綠素、熒光素的研究。