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熒光蛋白GFP+激發(fā)光源的應(yīng)用特點

熒光蛋白GFP+激發(fā)光源的應(yīng)用特點

時間:2020-8-3 編輯:SunLonge

熒光蛋白GFP在激發(fā)光源的照射下,人眼能明顯的看到熒光,而一起被廣泛應(yīng)用于各種生物研究,主要特性如下
1、易于檢測
GFP熒光反應(yīng)不需外加任何反應(yīng)底物,酶或其他共反應(yīng)銀子,也就不存在這些物質(zhì)可能難于進入細胞的問題,只需紫外線光或藍光激發(fā)光源激發(fā),即可發(fā)出綠色熒光,GFP發(fā)射的熒光用斗眼或用光顯微鏡就可以檢測到。靈敏度高,對于單細胞水平的表達也可識別,同時還可利用其進行定量檢測。由于GFP對活細胞基本無毒害,因此無需特殊處理就可以很方便進行活體觀察。而且,具有不同光譜特性的GFP突變體的獲得,使在同一細胞中同時分析兩種不同蛋白或啟動子成為可能,可以用于法語細胞學(xué)、藥物篩選、分析診斷燈研究。這就使GFP有可能成為一種快速、簡便、經(jīng)濟的標(biāo)記蛋白,GFP基因作為報道基因有很廣泛的用于。

2、熒光穩(wěn)定
GFP無光漂白現(xiàn)象,在很大PH范圍內(nèi)(PH7-12)都可以正常發(fā)出熒光,手溫度的影響也很小,只有在超過65℃時才會變性,即熒光消失。熒光顯微鏡強光照射下,GFP抗光漂白能力比熒光素強,特別是在450~490nm藍光波長下更穩(wěn)定,單在340-390nm或395-440nm范圍內(nèi),仍會發(fā)生光漂白現(xiàn)象。對于長時間光照,GFP也有很好的耐受性,根據(jù)Sheen等的研究,GFP在受體內(nèi)表達時可以持續(xù)得到不低于10min的熒光。

3、廣譜性
首先表現(xiàn)在它的表達幾乎不受種屬范圍的限制,在微生物、植物、動物中都獲得了成功的表達;其次就是沒有細胞種類和位置的限制,在各個部位都可以表達,在紫外線光或藍光激發(fā)光源激發(fā)下發(fā)出肉眼可見的熒光。

4、易于載體構(gòu)建
由于GFP較小,只含有238個氨基酸,編碼GFP的基因序列也比較短,約2.6KB,所以他可以很方便的同其他序列一起構(gòu)建多種質(zhì)粒,而不至于使質(zhì)粒過大影響轉(zhuǎn)化頻率。盡管野生型的GFP在某些植物和動物中表達很弱,但是可以通過更換GFP生色團氨基酸改變堿基組分、出去內(nèi)含子、更換強啟動子燈方法加強表達。Connack等篩選出三種含Ser65突變的突變體,在大腸桿菌中表達時,紫外線光或藍光激發(fā)光源激發(fā)下的熒光強度比野生型高約100倍。

5、無毒害
Chalfie等的研究表明:GFP對生活細胞基本無毒害,Sheen等的研究進一步表明:在玉米中,即便GFP在細胞中的表達量很高時,對細胞也不會產(chǎn)生明顯毒害,但是至今我們還不了解它對植物再生能力的影響。

本文資料來自網(wǎng)絡(luò),僅供參考,深圳熒鴻主要研究用于GFP激發(fā)的紫外線光/藍光激發(fā)光源,關(guān)于這方面的疑問,請咨詢0755-89233889。

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