激發(fā)光源激發(fā)GFP(綠色熒光蛋白Green Fluorescent Protein)發(fā)出熒光,讓我們能夠直接觀測(cè)到細(xì)胞內(nèi)部的運(yùn)動(dòng)分布等情況,為微觀和宏觀間架起一座橋梁,因此被廣泛用于生物、生態(tài)、醫(yī)學(xué)等科學(xué)研究。
–在干細(xì)胞移植領(lǐng)域的應(yīng)用
目前,常用的綠色熒光蛋白標(biāo)記干細(xì)胞的方式有3種:質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染、病毒載體轉(zhuǎn)染和綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。
綠色熒光蛋白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染具有操作簡(jiǎn)便、對(duì)干細(xì)胞的免疫源性和毒性小等優(yōu)點(diǎn),但不十分穩(wěn)定,容易丟失;
病毒載體的優(yōu)勢(shì)是表達(dá)高效穩(wěn)定,但存在免疫反應(yīng)和致癌性等安全隱患;
從綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因動(dòng)物分離得到的干細(xì)胞標(biāo)記穩(wěn)定,是理想的選擇。綠色熒光蛋白標(biāo)記的干細(xì)胞移植后在體內(nèi)的分布情況可在熒光顯微鏡下直接觀察到,結(jié)合使用定量聚合酶鏈反應(yīng)、激光共聚焦和熒光激活細(xì)胞分類計(jì)數(shù)等技術(shù)方法,還可監(jiān)測(cè)移植干細(xì)胞在體內(nèi)的分化增生情況以及其在各組織的含量等。
–在細(xì)胞生物學(xué)中的應(yīng)用
GFP具有同宿主蛋白構(gòu)成融合子的性質(zhì),利用這一性質(zhì),可以將GFP定位到特定的細(xì)胞器和膜系統(tǒng)中,進(jìn)行細(xì)胞生理過程、細(xì)胞動(dòng)力學(xué)等的實(shí)時(shí)觀測(cè),或直接應(yīng)用于定量分析。目前,GFP已經(jīng)被成功地用于靶向標(biāo)記包括細(xì)胞核、線粒體、質(zhì)體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等在內(nèi)的細(xì)胞器。用GFP進(jìn)行亞細(xì)胞定位,避免了提純蛋白、標(biāo)記異硫氰酸熒光素等熒光染料、經(jīng)顯微注射或其他方式導(dǎo)入細(xì)胞的復(fù)雜方法,從而使研究蛋白在活細(xì)胞的準(zhǔn)確定位變得簡(jiǎn)單易行。
–在分子生物學(xué)研究中的應(yīng)用
–在生物學(xué)研究中的應(yīng)用
GFP作為標(biāo)記分子,目前已被廣泛應(yīng)用于基因標(biāo)記、蛋白質(zhì)標(biāo)記、環(huán)境微生物研究、寄生蟲學(xué)研究以及發(fā)育生物學(xué)研究中基因表達(dá)模式的探索等方面,成為活細(xì)胞分子水平研究的工具。
–在生態(tài)學(xué)上的應(yīng)用
GFP在生態(tài)學(xué)中的應(yīng)用將GFP基因直接導(dǎo)入目標(biāo)生物或?qū)FP基因克隆到病毒、細(xì)菌或質(zhì)粒上,通過它們的介導(dǎo)而間接標(biāo)記目標(biāo)生物,進(jìn)行生態(tài)學(xué)規(guī)律研究。
用GFP基因標(biāo)記遺傳工程微生物以檢測(cè)其在水環(huán)境中的存活和去向。
跟蹤觀察微生物。
–在醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用
利用GFP示蹤證實(shí)了脂肪來源的干細(xì)胞的分化方向和分化能力;利用增強(qiáng)型GFP篩選合適的生物材料; GFP還用于細(xì)胞因子作用的研究以及活體動(dòng)態(tài)觀察的研究。
GFP廣泛應(yīng)用于視網(wǎng)膜的基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng)、目的基因的調(diào)控及感光細(xì)胞凋亡保護(hù)的研究。
在免疫學(xué)治療方面,應(yīng)用GFP作為表皮生長(zhǎng)因子受體研究的工具,并對(duì)第二信使蛋白進(jìn)行亞細(xì)胞定位,這既可以揭示其在活細(xì)胞內(nèi)作用,又可以觀察一些抗體和小分子酪氨酸激酶抑制劑等信號(hào)傳導(dǎo)抑制藥物的作用效應(yīng)。
–作為報(bào)告基因
GFP作為報(bào)告基因可用來檢測(cè)轉(zhuǎn)基因效率,把GFP基因連接到目的基因的啟動(dòng)子之后,通過測(cè)定GFP的熒光強(qiáng)度就可以對(duì)該基因的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。目前,此方法無論在農(nóng)桿菌介導(dǎo)或基因槍介導(dǎo)的植物遺傳轉(zhuǎn)化中還是在活細(xì)胞、轉(zhuǎn)基因胚胎和動(dòng)物中都已得到非常廣泛的應(yīng)用,特別是在活細(xì)胞基因表達(dá)的時(shí)空成像方面。
–作為融合標(biāo)簽
GFP最成功的一類應(yīng)用就是把GFP作為標(biāo)簽融合到主體蛋白中來檢測(cè)蛋白質(zhì)分子的定位、遷移、構(gòu)象變化以及分子間的相互作用,或者靶向標(biāo)記某些細(xì)胞器。在多數(shù)情況下,GFP基因在N-或C-末端與異源基因用常規(guī)的分子生物學(xué)手段就可以結(jié)合構(gòu)成編碼融合蛋白的嵌合基因,其表達(dá)產(chǎn)物既保持了外源蛋白的生物活性,又表現(xiàn)出與天然GFP相似的熒光特性。GFP的這種特性為蛋白質(zhì)提供了一種熒光標(biāo)記,不僅可以檢測(cè)蛋白質(zhì)分子的定位、遷移,還可以研究蛋白質(zhì)分子的相互作用以及蛋白質(zhì)構(gòu)象變化,并依靠熒光共振能量轉(zhuǎn)移來進(jìn)行檢測(cè)。
–其他應(yīng)用
野生型GFP和其許多突變體可以作為生物傳感器檢測(cè)活細(xì)胞內(nèi)的pH。
GFP還可以應(yīng)用于檢測(cè)電位、氧化還原水平以及在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中作為Ca2+指示劑。
GFP廣泛應(yīng)用于細(xì)胞篩選和藥物篩選 。
通過定點(diǎn)突變、DNA-shuffling?等技術(shù)對(duì)GFP進(jìn)行了改進(jìn),獲得了熒光光譜、量子產(chǎn)率、溶解性、密碼子嗜性、溫度敏感性等改變的多種突變體,擴(kuò)大了GFP的應(yīng)用范圍。
深圳熒鴻專業(yè)研發(fā)生產(chǎn)各種熒光蛋白激發(fā)光源,除了有能激發(fā)GFP發(fā)出熒光的光源還有能激發(fā)GFP衍生熒光蛋白(如YFP/RFP/BFP)等發(fā)出熒光的光源。激發(fā)光源樣式主要有手電筒式、手持式、桌面式,有單波長(zhǎng)激發(fā)光源也有雙波長(zhǎng)以及多波長(zhǎng)。深圳熒鴻激發(fā)光源采用進(jìn)口LED為光源,即開即啟,LED壽命長(zhǎng)達(dá)30000-50000小時(shí),更多問題請(qǐng)咨詢0755-89233889!